Die interne Totalreflexionsfluoreszenzmikroskopie (englisch: Internal Total Reflection Fluorescence Microscopy, ITRFM) ist eine Methode der Fluoreszenzmikroskopie, die es ermöglicht, hochauflösende Bilder von Proben in unmittelbarer Nähe einer Grenzfläche zu erstellen.
Bei der ITRFM wird Laserlicht durch ein Prisma oder einen speziellen Glasblock in einen Probenträger eingekoppelt. Dieses Licht wird an der Grenzfläche zwischen dem Probenträger und der Probe totalreflektiert, wodurch eine evaneszente Welle erzeugt wird. Die evaneszente Welle dringt nur eine sehr kurze Strecke in die Probe ein und regt dabei fluoreszierende Moleküle an. Durch das Detektieren der durch die Fluoreszenz emittierten Photonen kann ein hochauflösendes Bild der Probe erstellt werden.
Da die evaneszente Welle nur eine begrenzte Eindringtiefe hat, ermöglicht die ITRFM eine hohe laterale Auflösung und eine sehr hohe Kontraststärke. Diese Technik eignet sich insbesondere für die Untersuchung von transparenten oder dünnen Proben wie Zellmembranen, Oberflächenstrukturen oder Biomolekülen.
Die ITRFM bietet eine Vielzahl von Anwendungen in der Biologie und Materialwissenschaften. Sie kann zur Analyse von Zell-Zell-Interaktionen, Protein-Ligand-Wechselwirkungen oder zur Untersuchung von Oberflächeneigenschaften verwendet werden. Darüber hinaus ermöglicht sie die Untersuchung von Veränderungen in der Molekülverteilung oder der dynamischen Bewegung von Molekülen in der Nähe einer Grenzfläche.
Die ITRFM ist eine leistungsfähige und hochauflösende Methode der Fluoreszenzmikroskopie, die es ermöglicht, detaillierte Einblicke in subzelluläre Prozesse und biomolekulare Wechselwirkungen zu gewinnen.
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